重組豬瘟病毒封套醣蛋白E2與巴氏桿菌毒素次單位Tox1之選殖表現

出版年份: 
2002年
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摘要
豬瘟(classical swine fever; CSF)為豬隻之高度傳染性及高致死性的病毒性疾病,而E2為豬瘟病毒顆粒上三種封套醣蛋白之一,亦為豬瘟病毒結構中最主要引發豬隻產生中和抗體的抗原。為開發E2次單位標誌疫苗藉以區分施打疫苗與野外感染的豬隻,本實驗以桿狀病毒表現系統(baculovirus expression vector system; BEVS)表現重組之豬瘟病毒E2封套醣蛋白。而為使次單位疫苗更具有應用性,本實驗另外嘗試構築結合E2與其他重要疾病主要抗原之融合蛋白,期望在不影響彼此蛋白質摺疊與免疫原性的情況下,開發雙價次單位疫苗。Tox1為豬萎縮性鼻炎主要致病因子Pasteurella multocida產毒株所產生的毒素(Pasteurella multocida toxin; PMT)於大腸桿菌表現系統之N端重組次單位選殖株,並已證實此重組次單位抗原蛋白在豬隻具有良好之免疫原性與保護性。本實驗以桿狀病毒表現系統表現重組蛋白E2、Tox1與E2Tox1,步驟須先將其基因構築於轉置載體,利用轉置載體與桿狀病毒基因的同源性重組,將欲嵌入之基因置換至桿狀病毒的基因體內。並經過多次挑選藍綠色病毒斑之方式篩選並純化重組病毒後,再以具重組基因之桿狀病毒感染昆蟲細胞株,利用昆蟲細胞合成重組蛋白E2、Tox1與E2Tox1。經由重組病毒基因的定序與西方墨點法的確認,各重組蛋白均能在細胞株中正確表現,其分子量各約為39 kDa、60 kDa與95 kDa。再以此三種重組蛋白分別進行小鼠與豬隻之動物免疫實驗後,並證實重組蛋白E2、Tox1與E2Tox1亦均具有免疫原性,可引發對PMT毒素與豬瘟病毒之中和抗體的產生。初步證實本實驗所構築之蛋白質次單位疫苗具有免疫效力,未來可進行較大規模的動物免疫實驗並進行豬瘟病毒與PMT的攻毒試驗,以評估蛋白質次單位疫苗的保護效力。